微生物沉降涂抹作业指导书 1 参考标准: GBT 16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 2 涂抹操作(菌落总数、大肠菌群): 2.1配制药品:生理盐水(试管中+棉签)或直接采购无菌涂抹棒、PCA、VRBA 2.2培养基灭菌:PCA------121℃,15分钟;VRBA------无需灭菌,煮沸即可,生理盐水------121℃,15分钟 注:灭菌后的生理盐水需冷却彻底后才可以进行涂抹操作 2.3涂抹操作: 2.3.1取待测物(人员手部、操作案板、工器具表面等)涂抹面积为5*5cm2; 2.3.2涂抹后将与手部接触的棉签棒的部分折掉; 2.3.3检样作出2~3个稀释度: 1mL(原液) →无菌平皿中(10-1),2板菌落,2板大肠=4板 →9mL灭菌生理盐水中(10-2),2板菌落,2板大肠=4板 →于10-2试管中吸取1mL,加入9mL灭菌生理盐水中(10-3),2板菌落,2板大肠=4板 注:菌落倒入配置后灭菌的PCA,15~20mL,大肠倒入配制后灭菌的VRBA,15~20mL 2.3.4培养:待琼脂凝固后放入培养箱中,平皿倒置(除霉菌PDA外,其余平皿均倒置培养),36±1℃,大肠培养24小时,菌落培养48小时。 2.3.5查板计数:于N+1天,查大肠结果,N+2天,查菌落结果。 3沉降菌(菌落总数、霉菌) 3.1配制培养基:PCA、PDA; 3.2倒板:按照计划沉降点数,计算所需培养基及倒板的数量,PCA约20mL/板,PDA不得少于20mL/板(培养时间长,琼脂少就干巴了); 3.3沉降:车间在30m2以上者,于东、西、南、北(距墙1m处)、中五点;小于30m2者,于一条对角线里、中、外三点,高度均在1.5m处采样,打开平皿盖,使平板在空气中暴露5 min(操作时,周围不得有人员走动,防止结果不准); 3.4收板:将手部用75%酒精消毒后再收板,切忌触碰到平板内琼脂 3.5培养:PCA,36±1℃,培养48小时DA,28℃,培养5天; 3.6查板计数:于N+2天,查菌落结果,N+5天,查霉菌结果。 |