微生物沉降涂抹作业指导书 1 参考标准： GBT 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 2 涂抹操作（菌落总数、大肠菌群）： 2.1配制药品：生理盐水（试管中+棉签）或直接采购无菌涂抹棒、PCA、VRBA 2.2培养基灭菌：PCA------121℃，15分钟；VRBA------无需灭菌，煮沸即可，生理盐水------121℃，15分钟 注：灭菌后的生理盐水需冷却彻底后才可以进行涂抹操作 2.3涂抹操作： 2.3.1取待测物（人员手部、操作案板、工器具表面等）涂抹面积为5*5cm2； 2.3.2涂抹后将与手部接触的棉签棒的部分折掉； 2.3.3检样作出2~3个稀释度： 1mL（原液） →无菌平皿中（10-1），2板菌落，2板大肠=4板 →9mL灭菌生理盐水中（10-2），2板菌落，2板大肠=4板 →于10-2试管中吸取1mL，加入9mL灭菌生理盐水中（10-3），2板菌落，2板大肠=4板 注：菌落倒入配置后灭菌的PCA，15~20mL，大肠倒入配制后灭菌的VRBA，15~20mL 2.3.4培养：待琼脂凝固后放入培养箱中，平皿倒置（除霉菌PDA外，其余平皿均倒置培养），36±1℃，大肠培养24小时，菌落培养48小时。 2.3.5查板计数：于N+1天，查大肠结果，N+2天，查菌落结果。 3沉降菌（菌落总数、霉菌） 3.1配制培养基：PCA、PDA； 3.2倒板：按照计划沉降点数，计算所需培养基及倒板的数量，PCA约20mL/板，PDA不得少于20mL/板（培养时间长，琼脂少就干巴了）； 3.3沉降：车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min（操作时，周围不得有人员走动，防止结果不准）； 3.4收板：将手部用75%酒精消毒后再收板，切忌触碰到平板内琼脂 3.5培养：PCA,36±1℃,培养48小时 DA,28℃,培养5天； 3.6查板计数：于N+2天，查菌落结果，N+5天，查霉菌结果。 | 
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