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实验室常用试剂、缓冲液的配制方法浏览数:87次
1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配制方法 1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70 ml 7.6 约60 ml 8.0 约42ml 4.将溶液定容至1 L。 5.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度 1.5 MTris-HCl 配制量 1 L 配制方法 1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.用浓HCl调节pH值至8.8。 4.将溶液定容至1 L。 5.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高l℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。 1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0) 组份浓度 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液,置于l L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100 ml 500 mM EDTA(pH8.0) 20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。 3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。 4.室温保存。 3 M醋酸钠(pH5.2) 组份浓度 3 M醋酸钠 配制量 100 ml 配制方法 1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中,加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。 2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。 3.加去离子水将溶液定容至100 ml。 4.高温高压灭菌后,室温保存。 PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4.高温高压灭菌后,室温保存。 注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 100 ml 配制方法 1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100 ml。 3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶,室温保存。 注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。 Tris-HCl平衡苯酚 配制方法 1.使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须,160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2.操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 3.苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下: ①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。 ②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌l5min,静置使其充分分层后,除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min,静置使其充分分层后,除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 苯酚/氯仿/异戊醇 配制方法 l.说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚,氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2.配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 10%(W/V)SDS 组份浓度 10%(W/V)SDS 配制量 100 ml 配制方法 1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水,68℃加热溶解。 2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。 3.将溶液定容至100 ml后,室温保存。 2 N NaOH 组份浓度 2 N NaOH 配制量 100 ml 配制方法 1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 2.称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。 3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液定容至100 ml。 4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。 2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100 ml 配制方法 1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N),均匀混合。 2.室温保存。 5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。 2加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份。 3.高温高压灭菌后,4℃保存。 20%(W/V)Glucose(葡萄糖) 组份浓度 20%(W/V)Glucose 配制量 100 ml 配制方法 1.称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。 3.高温高压灭菌后,4℃保存。 Solution l (质粒提取用) 组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0),10 mM EDTA,50 mM Glucose 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液,置于l L烧杯中。 1 M Tris-HCl(pH8.0) 25 m 0.5 M EDTA(pH8.0) 20 m 20% Glucose(1.11 M) 45 m dH2O 910 m 2.高温高压灭菌后,4℃保存。 3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。 Solution Ⅱ(质粒提取用) 组份浓度 200 mM NaOH,1%(W/V)SDS 配制量 500 ml 配制方法 1.量取下列溶液,置于500 ml烧杯中。 10%SDS 50 ml 2NNa0H 50 ml 2.加灭菌水定容至500 ml,充分混匀。 3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。 Sol ution Ⅲ(质粒提取用) 组份浓度 3 M KOAc,5 M Ethanoic acid (乙酸) 配制量 500 ml 配制方法 1.称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。 KOAc 147g Ethanoic acid 57.5ml 2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至500 ml。 4.高温高压灭菌后,4℃保存。 0.5 M EDTA (pH8.0) 组份浓度 0.5 M EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称取186.1 g Na2EDTA•2H2O,置于1 L烧杯中。 2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。 3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。 注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。 4加去离子水将溶液定容至1 L。 5.适量分成小份后,高温高压灭菌。 6.室温保存。 1 M DTT 组份浓度 1 M DTT 配制量 20 ml 配制方法 1.称取3.09 g DTT,加入到50 ml料离心管内。 2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0 22 µm滤膜过滤除菌。 3.适量分成小份后,-20℃保存。 10 mM ATP 组份浓度 10 mM ATP 配制量 20 mL 配制方法 1.称取121 mg Na2ATP•3H2O,加入到50 ml塑料离心管内。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。 3.适量分成小份后,-20℃保存。 蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺) 组份浓度 30%(W/V)Acrylamide 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中。 Acrylamide 290 g BIS(双丙烯酰胺) 10 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L,用0.45 µm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。 注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。 40%(W/V)Acrylamide 组份浓度 40%(W/V)Acrylamide 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中。 Acrylamide 380 g BIS 20 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至l L,用0.45 µm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。 注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。 10%(W/V) AP (过硫酸铵) 组份浓度 10%(W/V)AP 配制量 10 ml 配制方法 1.称取1 g AP。 2.加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4℃。 注意:1 0%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右,超过期限会失去催化作用。 5×Tris-Glyclne Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液) 组份浓度 0.125 M Tris,1.25 M Glyclne(甘氨酸),0.5%(W/V)SDS 配制量 1 L 配制方法 1.称量下列试剂,置于l L烧杯中。 Tris 15.1 g Glyclne 94 g SDS 5.0 g 2.加入约800 ml的去离子水,搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。 2×SDS -PAGE Loading Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl(pH6.8) 100 mM β-巯基乙醇(2-ME) 4%(W/V) SDS 0.2%(W/V) 溴酚兰(BPB) 20%(V/V) 甘油 配制量 5 ml 配制方法 1.量取下列试剂,置于10 ml塑料离心管中。 0.25 M Tris-HCl(pH6.8) 0.25 ml β-巯基乙醇 0.5 ml SDS 0.2 g 甘油 1 ml 1%溴酚兰 0.1 ml, 2.加去离子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分装后,于室温保存。 4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 5×SDS-PAGE Loading Buffer 250 mM Tris-HCl(pH6.8) 10%(W/V) SDS 0.5%(W/V) BPB 50%(V/V) 甘油 5%(W/V) 2-ME 组份浓度 配制量 5 ml 配制方法 1.量取下列试剂,置于10 ml塑料离心管中。 1 M Tris-HCl(pH6.8) 1.25 ml SDS 0.5 g BPB 25 mg 甘油 2.5 ml 2.加去离子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分装后,于室温保存。 4.使用前将25 µl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。 考马斯亮蓝R-250染色液 组份浓度 0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250,25%(V/V)异丙醇,10%(V/V)冰醋酸 配制量 1 L 配制方法 1.称取1 g考马斯亮蓝R-250,置于1 L烧杯中。 2.量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。 3.加入100 ml的冰醋酸,搅拌均匀。 4.加入650 ml的去离子水,搅拌均匀。 5.用滤纸除去颗粒物质后,室温保存。 考马斯亮蓝染色脱色液 组份浓度 10%(V/V) Ethanoic acid,30%(V/V)乙醇 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液,置于l L烧杯中。 Ethanoic acid 100 ml 乙醇 300 ml dH2O 600 ml 2.充分混合后使用。 凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用) 组份浓度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V) Ethanoic acid 配制量 100 ml 配制方法 1.量取下列试剂,加入100~200 ml的试剂瓶中。 甲醇 500 ml Ethanoic acid 100 ml dH2O 400 ml 2.均匀混合后室温保存。
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