实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度  1 M Tris-HCl
配制量  1L
配制方法  1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
 3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值  浓HCl
7.4  约70 ml
7.6  约60 ml
8.0  约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)  
  组份浓度  1.5 MTris-HCl
配制量  1 L
配制方法  1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
 3.用浓HCl调节pH值至8.8。
 4.将溶液定容至1 L。
 5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)   
组份浓度  100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
配制量  1 L
配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)  100 ml
500 mM EDTA(pH8.0)  20 ml
 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
 3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
 4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)  
组份浓度  3 M醋酸钠
配制量  100 ml
配制方法  1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。
 2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。
 3.加去离子水将溶液定容至100 ml。
 4.高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer  
组份浓度  137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
配制量  1 L
配制方法  1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
NaCl  8 g
KCl    0.2 g
Na2HPO4  1.42 g
KH2PO4  0.27 g
 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
 3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
 4.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M醋酸铵  
组份浓度  10 M醋酸铵
配制量  100 ml
配制方法  1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
 2.加去离子水将溶液定容至100 ml。
 3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶，室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚  
配制方法  1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
 2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
 3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
 ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
 ②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
 ③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
 ④重复操作步骤③。
 ⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇  
配制方法  l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。  
 2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10%(W/V)SDS  
组份浓度  10%(W/V)SDS
配制量  100 ml
配制方法  1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。
 2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。
 3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。

2 N NaOH  
组份浓度  2 N NaOH
配制量  100 ml
配制方法  1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
 2.称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
 3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。
 4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5 N HCl  
组份浓度  2.5 N HCl
配制量  100 ml
配制方法  1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。
 2.室温保存。

5 M NaCl  
组份浓度  5 M NaCl
配制量  1 L
配制方法  1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
 2加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。  
 3.高温高压灭菌后，4℃保存。

20%(W/V)Glucose(葡萄糖)
组份浓度  20%(W/V)Glucose
配制量  100 ml
配制方法  1.称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。
 2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。
 3.高温高压灭菌后，4℃保存。

Solution l (质粒提取用)
  组份浓度  25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose
配制量  1 L
配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl(pH8.0)  25 m
0.5 M EDTA(pH8.0)  20 m
20% Glucose(1.11 M)  45 m
dH2O  910 m
 2.高温高压灭菌后，4℃保存。
 3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

Solution Ⅱ(质粒提取用)
组份浓度  200 mM NaOH，1%(W/V)SDS
配制量  500 ml
配制方法  1.量取下列溶液，置于500 ml烧杯中。
10%SDS  50 ml
2NNa0H  50 ml
 2.加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。
 3.室温保存。此溶液保存时间**不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

Sol ution Ⅲ(质粒提取用)
组份浓度  3 M KOAc，5 M Ethanoic acid (乙酸)
配制量  500 ml
配制方法  1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
KOAc  147g
Ethanoic acid  57.5ml
 2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
 3.加去离子水将溶液定容至500 ml。
 4.高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5 M EDTA (pH8.0)  
组份浓度  0.5 M EDTA
配制量  1 L
配制方法  1.称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
 3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。
   注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
 4加去离子水将溶液定容至1 L。
 5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
 6.室温保存。

1 M DTT  
组份浓度  1 M DTT
配制量  20 ml
配制方法  1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。
 2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 µm滤膜过滤除菌。
 3.适量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP  
组份浓度  10 mM ATP
配制量  20 mL
配制方法  1.称取121 mg Na2ATP•3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。
 3.适量分成小份后，-20℃保存。